Кызытсе†Кызытсе адрес: OX11 0DE, Великобританий, Алмаз пӧрт, Харвелл шанче да инноваций парк, Диткот, Оксфордшир, Великобританий, Алмаз волгыдо источник Co., Ltd., Электрон биологий сӱретлыме рӱдер.
Реакций рӱдер волгыдо погымо комплекс 1 (RC-LH1) — пурак фототрофный бактерий-влакын тӱҥ фотосинтез компонентышт. Ме Rhodopseudomonas palustris гыч RC-LH1 комплексын кок криоэлектрон микроскопий структуржым пуртенна. RC-LH114-W комплексын 2,65-Å разрешениян структурыжо RC йыр 14 субъединица LH1 петле гыч шога, тудым W белок дене пудыртат, а белок деч посна комплекс — RC дене йыр авыралтше тичмаш RC состав. петырен 16 субъединица LH1 цикл. Тиде структур-влакым таҥастарымаш RC-LH1 комплексыште хинон динамике нерген умылымашым пуа, тыгак RC QB сайтыште хинон дене кылдалтме годым ончыч рашемдыдыме конформационный вашталтыш-влак, тыгак полышкалышыже хинон дене кылдалтше вер-влакын верланымышт, нуным RC-лан кусараш полшат. W белокын шкешотан структурыжо LH1 циклым петыраш чаракым ышта, тыге хинон/хинолон вашталтышым писынрак ышташ каналым ышта.
Фотосинтез дене пуымо энергий мландӱмбалне чыла гаяк илышым арален коден кертеш, да тудын кече биотехнологийлан кугу потенциалже уло. Тӱнямбал фотосинтезым вияҥдыме годым, пурак фототрофный бактерий-влак тыгак тӱрлӧ энергий режимым да метаболический кертмым ончыктат. Нуно фотосинтез деч утлен кертыт да пычкемышыште гетеротрофный бактерий семын кушкын кертыт, азот ден углекислый газым пеҥгыдемден кертыт, водородым ыштен кертыт да ароматический соединений-влакым локтыл кертыт (1-3). Нине процесс-влаклан энергийым пуашлан волгыдым писын да пайдалын химий энергийыш савыраш кӱлеш. Тиде процесс тунам тӱҥалеш, кунам волгыдым кучышо антенне комплекс волгыдым поген налеш да кучышо энергийым реакций рӱдерыш (РР) кусара, тыге зарядым ойыраш тӱҥалеш (4 – 7). Пурпурный фототрофный бактерий-влакын фотосинтезыштын тӱҥ единицышт 2 тип RC гыч шога, тудын йырже волгыдо погымо комплекс 1 (LH1) уло, тудо RC-LH1 рӱдӧ комплексым ышта. LH1 αβ гетеродимер-влакын массивышт дене ышталтын, кажныже кок бактерий хлорофилл (BChl) a молекулым да ик але кок каротиноидым (8-12) ушен шога. Эн тыглай LH1 антенне 16 але 17 αβ гетеродимер гыч шога, нуно RC-м (9-13) петыртыме циклыште йыр авырен шогат, но моло тӱҥ комплекслаште трансмембранный пептид-влак йырым-йыр улшо LH1-ын умбакыже шуйнымыжым пудыртат, тыге RC ден цитохром bc комплекс коклаште хинол/хинон диффузийым кумылаҥдат (1111, 13). Пурпурный фототрофный кушкыл Rhodopseudomonas (Rps.) — модельный организм, тудо энергийым да электрон кусарымашым умылен кертеш, тудо фотосинтезлан полша. Икымше кристалл структур Rps. Palustris RC-LH1 комплексын модельже — RC, 15 гетеродимерный LH1 петле дене йыр авыралтын, нуным «Белок W» лӱман палыдыме белок пудырта (14). Варажым Protein-W RPA4402 семын палемдалтын, тиде кум прогнозироватлыме трансмембранный спираль (TMH) дене 10,5 кДа нехарактерный белок (16). Ме rpa4402 геным кодироватлыше W белокым pufW лӱм дене вашталташ темлена, тудо RC-L, M (pufL, pufM) да LH1α, β (pufA, pufB) субъединице-влакым кодироватлыше ген-влаклан кучылтмо номенклатур дене келшен толеш. Оҥай, белок-W RC-LH1-ын 10% наре гына уло, Rps-ым почын пуа. palustris кок тӱрлӧ RC-LH1 комплексым ыштен луктеш. Тыште ме кок тӱҥ комплексын кӱкшӧ разрешениян крио-ЭМ (крио-ЭМ) структурышт нерген увертарена, иктыже W белок да 14 αβ гетеродимер дене, весыже W белок деч посна да петыралтше 16 Гетеродимер LH1 цикл дене. Мемнан структурна Rps-ын RC-LH1 комплексшым умылымаште ошкыл вашталтышым ончыкта. palustris, вет ме кажне вариантын икгай популяцийжым лончыленна да кажне пептидым да кылдалтше пигмент-влакым да кылдалтше липид ден хинон-влакым раш палемдаш ситыше разрешениян улына. Тиде структур-влакым таҥастарымаш ончыкта: кум TMH белок-W, кудышт тыгай жап марте нимогай вес RC-LH1 комплексыште муын огытыл, хинон/хинон вашталтышым писынрак ышташ хинон каналым ыштат. Икмыняр аралыме липид ден хинон дене кылдалтше верым палемдыме, да ме хинон ден РК-н комбинацийышт деч вара у конформационный вашталтышым пален налынна, тудо кислород дене пойдаралтше фототрофный организм-влакын фотосистема II (PSII) РК-штлан келшен кертеш. Мемнан лектышна RC-LH1 рӱдӧ комплексыште пурак фототрофный бактерий-влакын хинон/хинолонын кылдалтме да вашталтыме кинетикышт нерген у шинчымашым пуа.
Rps-ыште мумо кок комплексым лончылаш куштылемдаш манын. palustris, ме кажне RC-LH1-ым биохимический йӧн дене ойырена. Белок W-дефицитный комплекс (умбакыже ΔpufW) pufW ген уке штамм гыч эрыктеныт (16), да ик RC-LH1 комплексым гына ыштен лукташ лиеш. Белок W-содержаний комплексым штамм ыштен луктеш. Тиде штаммын W белокшым С-мучашыштыже 10x His тег дене вашталтат, тыге белок W-содержаний комплексым металлым иммобилизоватлыме дене эн ситыдыме W белок дене пайдалын ушен кертыт. Комплекс эффектно ойырен (16) Аффинный хроматографий (IMAC).
рис ончыктымо семын, кок комплексыште кум подразделений RC (RC-L, RC-M да RC-H) улыт, нуным LH1 антенне дене йыр авыреныт. Белок-W деч посна комплексын 2,80-А структурыжо 16 αβ гетеродимерым ончыкта, нуно RC-м пӱтынек йыр авырен шогышо петыралтше LH1 петле ыштат, умбакыже RC-LH116 комплекс маналтеш. 2,65Å структур белок-W-содержанийже комплекс 14-гетеродимер LH1 пудыртен белок-W, умбакыже RC-LH114-W семын палемдалтын.
(А да В) Ӱмбал ончыктымаш соединений. (C да D) рожыш ончыктымо пигмент-влак. (Е да F) Цитоплазме ӱмбал гыч эскерыме комплекс-влак мультфильмлаште ончыктымо пептид ден LH1 субединице-влак улыт, да нуным белок-W ойыртем гыч шагат йыр нумероватлыме [Rba нумераций дене келшен толеш. сфероид комплекс (13)]. LH1-α-лан белок субединицан тӱсшӧ кӱшыл; LH1-β-лан белок субединицан тӱсшӧ шем; белок-W-лан белок ужар тӱсан; RC-H-лан тудо лазурный; RC-L-лан тиде Оранжевый; RC-M-лан, пурак. Кофактор-влак рож дене ончыкталтыт, ужар тӱс BChl ден BPh a молекул-влакым ончыкта, пурак тӱс — каротиноид-влакым, а йошкар тӱс — UQ10 молекул-влакым. (G да H) RC-LH114-W комплексын (G) да RC-LH116 комплексын (H) эквивалентный регионыштыжо белок-W ойыртемым кугемдыме ончыктымаш. Кофактор-влак пространствым темыме формышто ончыкталтыт, хелатированный хинон кок тӱсан ончыкталтеш. Белок-W ойыртем (G) кок пунктирный линий дене палемдалтын, а LH116 йыҥгыр ӱмбалне хинон/хинолол диффузий дене изи омса-влак (H) шем пунктирный линий дене палемдалтыныт.
рис (А да В) ончыкта, RC йырым-йыр почылтшо але петыралтше массив LH1αβ гетеродимер, кажныже кок BChl да ик каротиноид дене кылдалтын (рис 1, С да D). Ончычсо шымлымаш ончыктен: Rps — тиде LH1 комплекс. Спирулина ксантинын биосинтез корнышто нине вид-влак каротиноид-влакын тӱрлӧ популяцийыштым налыт (17). Туге гынат, спиропирроксантин — тӱҥ каротиноид, тудын тыгыдылыкше сита. Сандене ме чыла LH1 ушымо верыште спироксантиным моделироватлаш ойырен налынна. Альфа да бета полипептид-влак кӱчык мембранный тӱжвал ужаш дене ик ТМГ улыт (1-ше рис., А, В, Е да F). С-мучашыште 17 кодшо тыгыдылыкым эскерен огытыл гынат, кок комплексыштат альфа-полипептид Met1 гыч Ala46 марте шеледалтеш. β полипептид RC-LH116-ште Gly4 гыч Tyr52 марте, а RC-LH114-W-ште Ser5 гыч Tyr52 марте иземын. але 4 N-терминал але 13 C-терминал кодын тыгыдылыкше эскерен огыл (рис. S1). Дикий тип штамм гыч ямдылыме аралаш RC-LH1 комплексын масс-спектрометрий анализше ончыктен: йомшо регион нине пептид-влакын гетерологический шеледымашыштын лектышыже лийын (рис. S1 да S2). α-Met1-ын N-терминал формилироватлымашыже тыгак эскереныт (f). Анализ ончыктен: α-пептид fMet1 гыч Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 марте кодеш, а β-пептид Ser2 гыч Ala53 марте кодеш, тидыже низкотемпературный ЭМ плотность картыште келшен толеш.
α-His29 ден β-His36-ын координацийышт BChls-ым ваш-ваш вашлийын шога; кажне αβ гетеродимер шке лишыл еҥже-влак дене чумырген, RC йыр почылтшо петле (RC-LH114-W) але петыралтше петле (RC-LH116) ышта. Экситон дене кылдалтше пигмент массив (рис. 1, C да D). 877 нм диапазон дене таҥастарымаште RC-LH114-W, 880 нм поглощение ужар вашталтыш RC-LH116 3 нм (рис 2А). Туге гынат, йыргешке дихроизм спектр почти икгай (рис. 2В), тидыже ончыкта: почылтшо да петыралтше цикл коклаште раш ойыртем уло гынат, верысе среда BChls пеш икгай. Поглощений ужар вашталтыш петыртыме циклыште шокшо тарванылмашын иземмыж да пеҥгыдылыкше кугемме лектыш лийын кертеш (18, 19), петыртыме цикл дене кылдалтше пигмент ушнымашын вашталтмыже (20, 21), але нине кок эффектын комбинацийже (11).
(А) Ультрафиолет/ужмо/лишыл инфракрасный поглощений спектр, тудын пикше-влак шке келшыше пигмент дене палемдалтыныт да 775 нм-ыште BPh пик марте нормализоватлалтыт. (B) 805 нм годым BChl поглощенийлан нормализоватлыме йыргешке дихроизм спектр. (C да D) RC-LH114-W комплексын (C) да RC-LH116 комплексын (D) жап дене рашемдыме поглощений спектрже гыч ойырен налме ΔA спектр-влак. Сайрак таҥастараш манын, чыла спектр-влакым 0,2 пс годым −A-н ∆A марте нормализоватлат. (Е) UQ2 тӱрлӧ концентраций улмо годым облучений деч вара цитохром c2 окисленийын писылыкше (тӱҥ данный-влаклан S8 рис. ончо). (F) Клетке-влак йымалне кушкын йымалне, кокла але кугу куатан волгыдо (10, 30 але 300мкМм-2 s-1, шот дене), белок W да RC-L субъединице-влак эрыктен комплексыште да ойырен мембранный коэффициент. SDS-полиакриламид гель электрофорез да иммуноанализ дене белок кӱкшытым рашемдаш (сырьевой данный-влаклан S9 рис. ончо). Эрыктен лукмо RC-LH114-W комплекс дене таҥастарымаште коэффициентым рашемдыза. RC-L ден комплексын белок-W-н стехиометрический отношенийже 1:1.
RC-LH114-W-н деформироватлыме αβ14 петлыштыже 1-ше верыште улшо BChls-влак (рис. 1, А, С, да Е) RC-LH116-ште эквивалент BChls деч 6,8Å дене RC тӱҥ донор (P) деке лишкырак улыт (рис. 1, B, D, да F, да S3); туге гынат, кок комплексын эртыше поглощений кинетикышт ончыкта: RC-LH114-W ден RC-LH116-лан LH1 гыч RC марте возбуждение энергийым кусарыме жап константа-влак 40 ±4 да 44±3 пс улыт (2-шо рис). , C да D, рис S4 да таблице S2). Тыгак RC кӧргыштӧ электрон кусарыме шотышто кугу ойыртем уке (рис. S5 да тудын дене кылдалтше ешартыш текст). Ме шекланена, LH1 ден RC-P коклаште энергийым кусарыме жапын лишыл келшымашыже кок LH1 петлеште эн шуко BChl-ын икгай торалыкышт, лукшо да потенциальный энергийыштлан кӧра лийын. Коеш, LH1 энергий образецым шымлымаш эн изи торашке шуаш манын, субоптимальный верла гыч RC-шке энергийым тура кусарыме деч писынрак огыл. RC-LH114-W-ште почылтшо цикл LH1 петля тыгак структур анализлан изи температур условийыште изи шокшо движенийым эртен кертеш, да RC 1 верыште βBChls-ын пигментаций тораште пӧлем температур годым αβ14 йыҥгыр конформацийже кужурак.
RC-LH116 комплексыште 32 BChls да 16 каротиноид уло, да тудын чумыр радамже Thermochromatium (Tch.) pidpidum [Protein Data Bank (PDB) ID 5Y5S] (9), Thiorhodovibrio (Trv.) DB штамм (IDC) (PDB07)) гыч налме дене икгай. да шем водоросль (Blc.viridis) (PDB ID 6ET5) (10). Келыштарыме деч вара αβ гетеродимер-влакын верыштым изирак ойыртем-влак гына эскереныт, поснак 1-5, 15 да 16 (рис. S6). Белок-W улмыжо LH1 структурылан кугу влиянийым ышта. Тудын кум ТМХ-же кӱчык петле дене кылдалтыныт, N-терминалже комплексын люмен велныже, а С-терминалже цитоплазме велне (рис. 1А да 3, А гыч D марте). Протеин-W шукыж годым гидрофобный (рис. 3В), да TMH2 да TMH3 LH1αβ-14 дене кылым ыштен, трансмембранный ӱмбалым ыштат (рис. 3, B да E гыч G марте). Интерфейс тӱҥ шотышто трансмембранный областьыште Phe, Leu да Val кодеш гыч шога. Тиде кодеш-влак гидрофобный аминокислота да αβ-14 пигмент дене шыҥдаралтыныт. Южо полярный кодеш тыгак вашкыллан полша, нунын коклаште W-Thr68 ден β-Trp42 коклаште водородный кыл комплекс лончын ӱмбалныже (3-шо рис., F ден G). Цитоплазме ӱмбалне Gln34 αβ-14 каротиноид-влакын кето группышт дене лишыл. Тылеч посна, n-додецил β-d-мальтозид (β-DDM) молекул рашемдыме, да тудын гидрофобный умшаже белок-W ден αβ-14 коклаште интерфейс марте шуйнен, а липид умшаже организмыште верланен кертеш. Ме тыгак шижынна, молан манаш гын, C-терминал разрешений регион-влак белок W да RCH пеш лишыл улыт, но ойыртемалтше вашкыл-влакым ыштыме сферыште огыл (рис. 1, А да Е). Туге гынат, нине кок белокын рашемдыдыме С-терминал аминокислоташте вашкыл лийын кертеш, тидыже RC-LH114-W комплексым чумырымо годым белок-W-ым налме механизмым пуэн кертеш.
(А) Протеин-W, кудо мультфильм формо дене LH1αβ14 дене кылым куча, рож гай вел шинчыр (ужар) уло, тудо электростатике потенциал диаграммын ужашыштыже ончыкталтеш (0,13 контур кӱкшытан яндар шем ӱмбал). (B) Белок-W гидрофобный тӱсан ӱмбал дене ончыкталтеш. Полярный да заряженный кумдык-влак лазурит дене ончыкталтыт, гидрофобный кумдык-влак ош тӱсан, а виян гидрофобный кумдык-влак нарынче тӱсан. (C да D) Белок-W мультфильмыште ончыктымо, тудын ориентацийже (A) (C) дене икгай, да 180° (D) дене пӧрдын. Радамыште верланыме почеш ойыртемалтше кодеш-влак радуга тӱсан схемым налыт, кушто N-терминал кок, а C-терминал ужар. (Е) Протеин-W тыгаяк ончымаш дене, кузе (А), да белок-W:LH1 интерфейсыште кодшо-влак пижыктыме пале-влак дене рож дене ончыкталтыт. (F) Протеин-W мультфильмыште ончыктымо годым (E) да LH1αβ14 деч 90° пӧрдеш, а барыште ончыктымаште интерфейсын кодшо ужашыже-влак деч. Бета-полипептид гыч лекше кодеш-влак палемдалтыныт. Кофактор 1-ше рис тӱс дене келшыше штрих семын ончыкталтеш, шаланен β-DDM шем тӱсан, а кислород ужар тӱс дене ончыкталтеш. (G) (F)-ште ончыктымаш 180° пӧрдын, палемдыме альфа-полипептидын ойыртемалтше кодшо ужашыже-влак дене.
Protein-W αβ гетеродимерым алмашта (15-ше рис. 1F), тыге циклым петыраш да икымше кум αβ гетеродимерым тайналташ чаракым ышта. Палемдыме, эн кугу наклонность лукшо икымше αβ-1 гетеродимер плёнко нормальный деч 25° гыч 29° марте лийын (рис. 1, А да Е), тудо 2° гыч 8° наклонностьшо дене αβ-1 RC A раш контраст-LH116 (рис. 1, В да F) лийын. Кокымшо да кумшо гетеродимер-влак 12° гыч 22° марте да 5° гыч 10° марте тайналтыт. RC-н стерический мешаяшлан кӧра αβ-1-ын тайнышт αβ-н кокымшо паржым ок пурто (1F рис. 16-шо αβ-лан келшен толеш), тыге LH1 йыҥгырыште раш ойыртемым ыштат (1-ше рис., А да Е) . Кок αβ гетеродимер укелан кӧра, куд BChl ден кок каротиноид йоммо дене пырля, каротиноид-влак кокла гыч иктыжат пӱтырналтше αβ-1 субъединице дене кылдалтын огыл, тидын лектышыштыже LH114-W йыҥгыр лектеш, тушто 13 каротиноид Вегетарианский да 28 BChls улыт. αβ1 гыч 7 марте регионлаште кок комплексын верысе разрешениян оценкышт LH1 циклын моло ужашыж деч изирак улыт, тидыже RC QB сайт дене лишыл LH1 субъединицан шкешотан пластичностьшым ончыктен кертеш (4-ше рис.) .
Сӱрет-влак RC-LH114-W (А да В) да RC-LH116 (С да D) икгай ӱлнӧ/вел гыч ончыктымо (А да В) (А да С) да лончо ӱмбал рис. 1. (В да D). Тӱсан клавиш-влак пурлаште ончыкталтыт.
Вес характеристикым рӱдӧ комплекс 1:14 стехиометрический коэффициент дене гына Rhodococcus sphaeroides (Rba.) RC-LH1-PufX димер (13). Туге гынат, W ден PufX белок-влакын раш гомологийышт уке, да нунын LH1 структурыштлан кугу влиянийым ыштат. PufX — тиде ик ТМХ, N-терминал цитоплазме домен дене, тудо RC-H субъединицан (13) цитоплазме могыржо дене Rps-лан келшыше верыште кылым куча. палустрис LH116αβ-16. PufX RC-LH1 ден цитохром bcl комплекс коклаште хинон/хинолон вашталтышлан каналым ышта да чыла Rba-ште уло. sphaeroides рӱдӧ комплекс (13). Мономер-мономер интерфейс Rba-ште гынат. Sphaeroides RC-LH1-PufX димер RC-LH114-W-ште W белокын ушымо верыштыже верланен, а PufX ден белок-W дене тарватыме ойыртем эквивалент верыште верланен (рис. S7A). RC-LH114-W-ште ойыртем тыгак Pseudomonas rosea LH1-ын гипотетический хинон каналже (8) дене келшен толеш, тудо W але PufX белок дене кылдалтдыме пептид-влак дене ышталтын (рис. S7B). Тылеч посна, Blc-ште хинон канал. Изумруд шем LH1 ик γ субъединице (7) деч посна ыштыме дене тыгаяк верыште верланен (рис. S7C). Тӱрлӧ белок дене медиировать гынат, RC-LH1 комплексыште тыглай верыште тиде хинон/хинолол канал-влакын коймышт конвергентный эволюцийын примерже семын коеш, тидыже ончыкта: W белок дене ыштыме ойыртем хинон канал семын выступатлен кертеш.
LH114-W циклыште ойыртем RC-LH114-W комплексын кӧргӧ пространствыже ден оптовый мембране коклаште умбакыже шуйнышо мембранный областьым ышташ йӧным пуа (рис. 1G), а кок доменым белок пор гоч ушен огыл, а белок семын. RC-LH116 комплекс петыралтше Tch гай. Игле гай комплекс (22) (рис. 1Н). Мембране гоч хинон диффузий тар белок канал гоч диффузий деч писынрак улмылан кӧра, почылтшо LH114-W петля петыралтше LH116 петле деч писынрак RC оборотым йӧным пуэн кертеш, а хинон диффузий RC утларак ограничительный лийын кертеш. W белокын RC гоч хинон-влакын савыртышыштлан эҥгекым ыштымыжым тергаш манын, ме убихинон 2 (UQ2) (пӱртӱс UQ10-ын кӱчыкрак изопрен умша дене аналогшо) (пӱртӱс UQ10-ын аналогшо) икмыняр концентрацийыште цитохром окислений анализым эртаренна (2Е рис.). Хелатированный хинон улмыжо раш рашемдаш чаракым ышта гынат, койшо Михаэлис константым (RC-LH114-W да RC-LH116 0,2±0,1мкМ да 0,5±0,2мкМ келшен толыт), RC-LH114-W-ын эн кугу темпше ( 4,6±026-2-1) s-1-1-1. 28±5% RC-LH116 деч кугурак (3,6±0,1 e-RC-1 s-1).
Тӱҥалтыште ме шотлен луктынна, молан манаш гын, белок-W тӱҥ комплексын 10% наре ужашыштыже уло (16); тыште волгыдо, кокла волгыдо да кугу волгыдо кушмо клетке-влакын занятостьышт 15±0,6%, 11±1% да 0,9±0,5, шот дене % (рис. 2F). Масс-спектрометрийым количественный таҥастарымаш ончыктен: гистидин тегым ешарымаш дикий тип штамм дене таҥастарымаште белок-W-ын относительный шуко улмыжым иземден огыл (Р = 0,59), сандене тиде кӱкшыт-влак вашталтыме белок-W-н артефактше огытыл (рис. S10). Туге гынат, RC-LH1 комплексыште белок-W-н тиде изи занятостьшо южо RC-лан писынрак савырнаш йӧным пуэн кертеш, тыге RC-LH116 комплексыште хинон/хинолонын вашталтышыжым лушкыдемда. Ме шижынна, кугу волгыдо занятость ставкын пытартыш жапыште транскриптомический данный дене келшен ок тол, тидыже ончыкта, pufW генын экспрессийже виян волгыдо йымалне кугемеш (рис. S11) (23). pufW транскрипций ден RC-LH1 комплексыш белок-W пуртымаш коклаште ойыртем путаен да белокын комплексный регулироватлымашыжым ончыктен кертеш.
RC-LH114-W-ште 6 кардиолипин (CDL), 7 фосфатидилхолин (POPC), 1 фосфатидилглицерин (POPG) да 29 β-DDM молекул ойыралтыт да тушто 6 CDL, 24 POPC, 2 POPG да 212 βDDM моделироватлалтыт. RC-LH116 (5-ше рис, А да В). Тиде кок структурышто CDL комплексын цитоплазме могырыштыжо верланен, а POPC, POPG да β-DDM утларакше луминальный могырышто верланеныт. RC-LH114-W комплексын αβ-1 гыч αβ-6 марте ужашыштыже кок липид да моющий средства молекул ойырен налме (5А рис.), а вич RC-LH116 эквивалент ужашыште (5В рис.). Комплексын вес могырыштыжо шукырак липид-влакым мумо, тӱҥ шотышто CDL, RC ден αβ-7 коклаште αβ-13 марте погынен (рис. 5, А да В). Вес структурно рашемдыме липид ден моющий средства-влак LH1 йыҥгыр деч ӧрдыжтӧ верланеныт, да сайын рашемдыме ацил шинчыр-влак LH1 субъединице коклаште шуйнат, нуным RC-LH114-W-ште β-DDM семын ончылгоч палемдыме, а RC-ште β-DDM семын палемдыме β-DDM ден PO1PC-LH16-LH16. Мемнан структурышто хелатироватлыше липид ден моющий средства-влакын икгай верланымышт ончыкта, нуно физиологически кӱлешан связываний вер улыт (рис. S12A). Tch-ыште эквивалент молекул-влакын верланымышт тыгак сай келшымаш дене ойыртемалтеш. Йӱштӧ да Трв. Штамм 970 RC-LH1s (рис. S12, B гыч E марте) (9, 12) да липид вуй группын водород дене кылдалтше кодеш-влак радам келыштарыме годым ятырлан сай аралыме койыш-шоктышым ончыктеныт (рис. S13), тидыже ончыкта: RC дене кылдалтше аралыме CDL (24), тиде вер-влак RCH-LH1 комплексыште арален коден кертыт.
(А да В) RC-LH114-W (А) да RC-LH116 (В) пептид-влак мультфильм дене ончыкталтыт, а пигмент-влак рож дене ончыкталтыт, 1-ше рисыште тӱс схемым кучылтын. Липид-влак ужар тӱсан, а моющий средства-влак — шем тӱсан. RC QA да QB сайт-влак дене кылдалтше UQ кӱшыл, а ойырен налме UQ — кок. (C да D) (A) да (B) семынак, липид-влакым луктын кудалтыме дене. (E to G) RC-LH116 гыч Q1(E), Q2(F) да Q3(G) кумдаҥдыме ончымаш, икте-весылан влиянийым ыштыше вел шинчыр-влак дене. Водородный кылым шем пунктирный линий дене ончыктымо.
RC-LH116-ште зарядым ойырымо процессыште электрон кусарымаште участвоватлыше RC QA ден QB UQ коктынат шке ушымо верлаштышт шаланат. Туге гынат, RC-LH114-W-ште QB хинон рашемдыме огыл, да тидын нерген умбакыже лончылаш тӱҥалыт. QA да QB хинон деч посна, кок хелат UQ молекул (RC да LH1 йыҥгыр коклаште верланыше) RC-LH114-W структурышто нунын сайын рашемдыме вуй тӱшкашт почеш ойыралтеш (Q1 да Q2 верланыше, шот дене). Сандалык). 5С рис). Q1-лан кок изопреновый единице ойыралтеш, а тыгыде картыште Q2-ын 10 изопреновый умшажым рашемдат. RC-LH116 структурышто кум хелатированный UQ10 молекул (Q1 гыч Q3 марте, рис 5D) рашемдыме, да чыла молекулын умша мучко раш тыгыдылыкше уло (рис. 5, D гыч G марте). Кок структурышто Q1 ден Q2 хинон вуй тӱшка-влакын верланымышт чапле келшен толыт (рис. S12F), да нуно RC дене гына кылым куча. Q1 RC-LH114-W W ойыртем пурымаште верланен (рис. 1G да 5, C, D да E), а Q2 QB ушнымо вер воктене верланен (рис. 5, C, D) да F). Консервироватлыме L-Trp143 да L-Trp269 кодеш-влак Q1 ден Q2 деке пеш лишыл улыт да π-стакинг вашкылым пуат (5-ше рис, E да F, да S12 рис). L-Gln88, 3,0 Å деч дистальный кислород Q1, пуа пеҥгыде водородный кылым (рис 5Е); тиде кодшо эн торасе кыл деч посна чыла РК-ште аралалтеш (рис. S13). L-Ser91 эн моло RC-ште Thr-лан консервативно алмашталтеш (рис. S13), Q1-ын метил кислородшо деч 3,8 ангстром тораште, да лушкыдо водородный кылым пуэн кертеш (рис. 5Е). Q3 ойыртемалтше вашкыл уке, но RC-M субъединице ден LH1-α субъединице 5 гыч 6 марте гидрофобный регионышто верланен (5-ше рис, D да G). Q1, Q2 да Q3 але лишыл хелатированный хинон-влак тыгак Tch-ыште решатлалтеш. Йӱштӧ, Трв. Штамм 970 да Blc. Ирис структур (9, 10, 12) RC-LH1 комплексыште арален кодымо полышкалыше хинон дене кылдалтше верым ончыкта (рис. S12G). RC-LH116-ште вич локтылалтше UQ-влак кӱкшӧ лектышан жидкостной хроматографий (ВЭЖХ) дене рашемдыме кажне комплексын 5,8±0,7 дене келшен толыт, а RC-LH114-W-ште кум локтылалтше UQ-влак 6,2±0,3 (рис. S14) деч изирак улыт. структура.
Псевдосимметричный L да M полипептид-влак кажныже вич ТМХ-ым куча да гетеродимерым ыштат, тудо ик BChl димерым, кок BChl мономерым, кок бактериофаг (BPh) мономерым, ик гем огыл кӱртньӧ ден ик але кок UQ10 молекулым ушен шога. Терминальный кетон группышто водородный кыл улмо да тудын Rps-ыште палыме погынымашыже гоч каротиноид-влак М-субъединицашке пурат, тудым цис-3,4-дегидроорходопин маныт. Тӱрлык (25). RC-H-ын тӱжвал мембранный доменже мембране дене ик ТМХ дене пеҥгыдемдалтын. Чумыр RC структур родо-тукым вид-влакын (мутлан, Rba) кум субединица RC дене икгай. сфероид-влак (PDB ID: 3I4D). BChl ден BPh макроцикл-влак, каротиноид рӱдӧ да гем огыл кӱртньӧ нине структур-влакын разрешений диапазоныштышт ваш пернат, тыгак QA верыште UQ10 вуй группо да RC-LH116 верыште QB хинон (рис. S15).
Кок RC структурын улмыжо тӱрлӧ QB сайтын занятостьшо дене QB хинон дене кылдалтме дене пырля лийше конформационный вашталтышым тергаш у йӧным пуа. RC-LH116 комплексыште QB хинон тичмашнек кылдалтше «проксимальный» койышышто верланен (26), но RC-LH114-W ойыркалымаште QB хинон уке. RC-LH114-W-ште QB хинон уке, тидыже ӧрыктарыше, вет комплекс чолга, структурно рашемдыме QB хинон дене RC-LH116 комплекс деч утларак. Кок LH1 йыҥгыр шым хинон наре хелат гынат, вич петыралтше RC-LH116 йыҥгыр структурно рашемдалтеш, а кум гына почылтшо RC-LH114-W йыҥгыр структурно чеклалтеш . Тиде кугемдыме структур локтылалтмаш RC-LH114-W QB сайт-влакын писынрак вашталтымыштым, комплексыште хинон кинетикым писынрак да LH1 петле гоч эртыме йӧн кугеммым ончыктен кертеш. Ме темлена, RC-LH114-W-ын RC QB-сайтыштыже UQ укелык утларак сложный да чолгарак комплексын лектышыже лийын кертеш, а RC-LH114-W-ын QB-сайтше UQ-влакын оборотыштышт вигак шӧртньӧ лийын. Конкретле этап (QB-сайтыш пурымаште петыреныт) тиде активностьын конформацийжым ончыкта.
QB деч посна, L-Phe217-ын UQ10 ушымаш дене келшыдыме верыш пӧрдмӧ, вет тудо умшаште икымше изопреновый единице дене пространственный тӱкнымешке лектеш (6А рис.). Тидын деч моло, раш тӱҥ конформационный вашталтыш-влак раш улыт, поснак спираль de (TMH D ден E коклаште циклыште кӱчык спираль) кушто L-Phe217 QB связывающий кӱсеныш куснен да L-Tyr223 пӧрдмӧ (рис. 6А ) M-A45 дене водородный связьым пудырташ да QB связывающий кышкаржым петыраш сайт (рис. 6В). Спираль де шке негызыштыже пӧрдеш, L-Ser209-ын Cα 0,33Å куснен, а L-Val221Cα 3,52Å куснен. ТМХ D ден Е-ште эскерыме вашталтыш уке, нуно кок структурыштат ӱмбалне улыт (рис. 6А). Кузе ме палена, тиде пӱртӱс RC-ште икымше структур, тудо QB сайтым петырен. Пӱтынь (QB-связанный) структур дене таҥастарымаште ончыкта: хинон иземме деч ончыч, тудым хиноныш пурташ конформационный вашталтыш кӱлеш. L-Phe217 пӧрдеш, хинон вуй группо дене π-укладка вашкыл ышташ манын, а спираль ӧрдыжкӧ куснен, L-Gly222 скелетлан да L-Tyr223 вел шинчырлан пеҥгыде водород кыл структур дене водород кыл сетьым ышташ йӧным пуа (рис. 6, А да С).
(А) Голограммын (L шинчыр, нарынче/М шинчыр, пурпур) да апо (шем) структурын ваш тӱкныме мультфильмышт, кушто тӱҥ кодшо-влак рож гай ончыктымаш формышто ончыкталтыт. UQ10 кӱшыл тасма дене ончыкталтеш. Точечный линий уло структурышто лийше водородный кылым ончыкта. (В да С) Аполипопротеинын да пӱтынь йыҥгыр структурын ӱмбал ончыктымашыже, L-Phe217-ын вел шинчыр кислородшым кок тӱсан да L-Tyr223-ын ужар тӱсан, шот дене. L субединица нарынче тӱсан; М ден Н субединице-влак тӱсан огытыл. (D да E) Аполипопротеин (D) да пӱтынь (E) RC QB сайт-влак [тӱс дене (A) шот дене] да Thermophilus thermophilus PSII (шем, шем пластика хинон дене; PDB ID: 3WU2) келыштарыме (58).
Вучыдымын, LH1 деч посна QB-дефицитный RC-влакын икмыняр структурышт уло гынат, тиде шымлымашыште эскерыме конформационный вашталтыш-влак нерген ончыч увертарен огытыл. Тиде Blc гыч QB пытарыме структурым пурта. виридис (PDB ID: 3PRC) (27), Тч. тепидум (PDB ID: 1EYS) (28) да Rba. sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29), чыланат нунын чумыр QB структурышт дене икгай улыт. 3PRC-ым тыгыде тергымаш ончыктен: LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Oxide) моющий средства молекул-влак QB положенийын пурымаште кылдалтыт, тидыже петыртыме конформацийыш вашталташ чаракым ыштен кертеш. LDAO 1EYS але 1OGV-ште ик верыште ок шалане гынат, нине RC-влакым икгай мушмо средства дене ямдылат, сандене икгай эффектым ыштен кертыт. Rba-н кристалл структурыжо. Sphaeroides RC цитохром c2 дене пырля кристаллизоватлыме (PDB ID: 1L9B) тыгак петыралтше QB сайт уло, коеш. Туге гынат, тиде случайыште, N-терминал регион RC-M полипептид (Взаимодействовать QB связывающий сайт гоч H связь Tyr кодын Q спиральыште) налеш неестественный конформаций, да QB конформационный вашталтыш умбакыже шымлыме огыл (30 ). Мо ӱшандарен, ме тыгай деформаций М полипептид RC-LH114-W структурышто ужын огынал, тудо почти икгай N-терминал регион RC-LH116 RC. Тыгак палемдыман, моющий средства негызеш LH1 антенным пытарымеке, PDB-ште аполипопротеин RC-влак пытеныт, тидыже RC ден йырым-йыр улшо LH1 йыҥгыр кӧргӧ ӱмбал коклаште кӧргӧ хинон пулан да липид-влакым пытарен (31, 32). RC функциональный кодеш, вет тудо чыла кофакторым арален кода, разлагаемый QB хинон деч посна, тудо шагалрак пеҥгыде да ямдылыме процесс годым чӱчкыдын йомеш (33). Тылеч посна, пале, мом кораҥдаш LH1 да пӱртӱс циклический липид-влак RC гыч функций-влаклан влиянийым ыштен кертеш, кузе тыгай кӱчыкемдыме ӱмыржӧ заряд дене ойырен P+QB-состоянийыште (31, 34, 35). Сандене ме шонен луктына: RC йыр верысе LH1 йыҥгыр улмыжо «петырен» QB верым арален коден кертеш, тыге QB воктене верысе средам арален коден кертеш.
Аполипопротеин (QB хинон деч посна) да тичмаш структурыжо QB сайтын савыртышыжын кок снимкыжым гына ончыктат гынат, событий-влакын радамышт огыл, тыгай ончыктымаш-влак улыт: гидрохинон дене угыч ушнымашым чараш манын, связывание капка лийын кертеш Субстрат торможитлымашым тормозитлаш. Аполипопротеинын QB верже воктене хинолол ден хинонын вашкылышт тӱрлӧ лийын кертеш, тидыже тудым RC деч кораҥмаш деке конда. Шукертак темлалтеш, конформационный вашталтыш-влак хинон-влакын кылдалтмышт да иземмышт годым рольым модыт. Пычкемышлан келыштарыме деч вара йӱштӧ РК-влакын хинон-влакым иземдаш лийме вийышт локтылалтын (36); Рентгеновский кристаллографий ончыкта, тиде эҥгек QB хинон-влакын активный проксимальный койыш деч 4,5 Å наре тораште «дистальный» конформацийыште локтылалтмыштлан кӧра лийын (26) , 37). Ме темлена, тиде дистальный связывающий конформаций — тиде аполипопротеин ден толын йыҥгыр структур коклаште кокла состоянийын снимкыже, тудо хинон дене тӱҥалтыш вашкыл да QB сайтым почмаш деч вара кая.
Южо фототрофный бактерий ден цианобактерийын, водоросльын да кушкыл-влакын PSII комплексыштышт улшо II тип RC структур да функциональный аралыме (38). 6-шо рисыште ончыктымо структур келыштарыме (D да E) PSII RC-влак ден бактерий RC комплексын QB верже коклаште икгайлыкым палемдат. Тиде таҥастарымаш шукертак хинон дене кылдалтше да иземдыме тыгыде кылдалтше системым шымлыме модель лийын. Ончычсо савыктыш-влак темленыт, конформационный вашталтыш-влак PSII хинон-влакын иземмышт дене пырля лийыт (39, 40). Сандене, RC-н эволюций аралалтмыжым шотыш налын, тиде ончыч эскерыдыме ушымаш механизмым кислород дене пойдарыме фототрофный кушкыллаште PSII RC-н QB-сайтыштыже кучылташ лиеш.
Rps ΔpufW (немаркированный pufW делеция) да PufW-His (C-терминал 10x His-тегированный белок-W, пӱртӱс pufW локус гыч экспрессироватлалтеш) штамм-влак. palustris CGA009 мемнан ончычсо пашаште (16) сӱретлалтеш. Тиде штамм-влакым да изогенный дикий тип ача-авам морозильник гыч PYE (кажныже 5 г литр -1) (LB-ште -80 °C температурышто аралыме, 50% ( w/v) глицерин) белок, дрожжевой экстракт да сукцинат) агар [1,5% (w/v) тарелкыште изирак клетке-влакым ӱштын лукмо дене луктыныт. Плитам йӱдым пычкемышыште пӧлем температур годым анаэробный условийыште инкубироватьленыт, вара 3-5 кече жапыште ик колоний лекмешке OSRAM 116-W галогенный лампе (RS Components, UK) дене пуымо ош волгыдо дене (~50 μmolm-2 s-1) волгалтареныт. Ик колонийым 10 мл М22+ средам (41) 0,1% (w/v) касаминокислота дене ешарен (умбакыже М22) инокулироватлаш кучылтыныт. Культурым пычкемышыште 34°C температур годым 180 об/мин 48 шагат жапыште лӱҥгалтен, изи кислород условийыште куштеныт, вара тыгаяк условийыште 24 шагат жапыште 70 мл культурым инокулироватленыт. мл кугытан полуаэробный культурым 30 мл универсал винтан ӱлыл яндар стекло бутылкыш 30 мл М22 средам инокулироватлаш кучылтыт да 48 шагат жапыште стерильный магнит вий дене (~50 мкмольм-2 с-1) стерильный магнит вий дене волгалтарат. Вара тыгаяк условийыште 30 мл культурым 1 литр наре культурым ӱштыныт, вара 72 шагат жапыште ~200 мкмольм-2 с-1 волгалтарыме 9 литр наре культурым ӱштыныт. Клетке-влакым 7132 RCF 30 минут жапыште центрифугироватлыме дене погеныт, ~10 мл 20 мМ трис-HCl (рН 8,0) дене угыч шыҥдареныт да кӱлеш марте -20°C температурышто араленыт.
Оттаивание деч вара, икмыняр кристалл дезоксирибонуклеаза I (Мерк, Великобританий), лизоцим (Мерк, Великобританий) да кок Roche голофермент протеаза ингибитор таблеткым (Мерк, Великобританий) ресуспендировать клеткылашке ешарен. 000 psi француз давлений ячейкыште (Aminco, США) ячейке-влак 8 гыч 12 гана пудыртеныт. Пудыртыдымо клетке-влакым да эрыктыдыме ломым 18 500 RCF 15 минут жапыште 4°C центрифугироватлыме дене кораҥдымеке, мембраным пигментированный лизат гыч 113 000 RCF 2 шагат жапыште 43 000 °C центрифугироватлыме дене осаждение дене луктыныт. Растворимый фракцийым кудалтыза да тӱсан мембраным 100 гыч 200 мл марте 20 мМ трис-HCl (рН 8,0) дене угыч суспензироватлыза да уждымо агрегат-влак лиймешке гомогенизироватлыза. Суспендироватлыме мембраным 20 мМ трис-HCl (рН 8,0) (Anatrace, США) 2% (w/v) β-DDM дене 1 шагат жапыште пычкемышыште 4°C температур годым ласкан ӱпшалын инкубироватьленыт. Вара 70°C температурышто 150 000 RCF-ым 4°C температурышто 1 шагат жапыште эрыктен, кодшо нерастворимый веществам кораҥдаш центрифугироватлыман.
ΔpufW штамм гыч растворимый мембране 50 мл DEAE Sepharose ион вашталтыш колонкыш кум колонко объем (CV) связывающий буфер дене [20 мМ трис-HCl (рН 8,0) 0,03% (w / v) β-DDM] дене шыҥдаралтын. Колонкым кок CV связывающий буфер дене мушман, вара колонкым кок связывающий буфер дене мушман, тушто 50 мМ NaCl уло. RC-LH116 комплексым 150 гыч 300 мМ NaCl (связывающий буферыште) линейный градиент дене 1,75 CV ӱмбалне элюироватленыт, а моло связывающий комплексым 0,5 CV ӱмбалне 300 мМ NaCl дене связывающий буфер дене элюироватленыт. 250 да 1000 нм коклаште поглощений спектрым поген, 880 гыч 280 нм марте 1 деч кугурак поглощений коэффициент дене фракцийым (A880/A280) кучыза, тудым связывающий буферыште кок гана луктын, тыгаяк процедурым уэш кучылташ DEAE колонко On purification. A880/A280 1,7 деч кугурак да A880/A805 3,0 деч кугурак коэффициент дене фракций-влакым луктын, ион вашталтышын кумшо туржым эртарыза да 2,2 деч кугурак A880/A280 коэффициент дене да 5,050 деч кугурак A880/A805 коэффициент дене фракций-влакым арален кодыза. Частично эрыктен лукмо комплексым ~2 мл марте Amicon 100,000 молекулярный нелытан ӱзгар (MWCO) центробежный фильтрыште (Merck, UK) чумыреныт, да Superdex 200 16/600 кугыт дене лукмо колонкыш (GE Healthcare, US) 200 мм NaCl буфер дене да тыгаяк буферыште элюгироватьленыт. CV. Кугыт лукмо фракцийын поглощений спектржым поген, поглощений спектр-влакым A880/A280 2,4 деч утларак да A880/A805 5,8 гыч 100 A880 марте A880/A805 коэффициент дене чумырен, вигак нуным крио-ТЭМ торым ямдылыме але аралыме годым кучылташ кӱлеш.
PufW-His штамм гыч растворимый мембране 20 мл HisPrep FF Ni-NTA Sepharose колонкыш (20 мМ tris-HCl (рН 8,0) 200 мМ NaCl да 0,03% (w/w)) IMAC буферыште ( GE Healthcare) шыҥдаралтын. v) β-DDM]. Колонкым вич CV IMAC буфер дене мушмо, а вара вич CV IMAC буфер дене, 10 мМ гистидин дене. Тӱҥ комплексым колонко гыч вич IMAC буфер дене 100 мМ гистидин дене луктыныт. RC-LH114-W комплексым налше фракцийым Amicon 100,000 MWCO фильтр дене пойдаралтше (Merck, UK) ӱпшалтше танкыште ~10 мл марте концентрироватлат, 20 гана связывающий буфер дене луштарат, вара 25 мл марте ешарат. Колонкым куд CV связывающий буфер дене мушман, вара комплексым кандаш CV-ште 0 гыч 100 мМ марте NaCl (связывающий буферыште) линейный градиент дене элюций, а моло куд CV-ште 100 мМ связывающий буфер уло. A880/A805 4,6 фракций деч кугурак коэффициент дене ~2 мл марте Amicon 100,000 MWCO центробежный фильтрыште чумыргеныт да ончылгоч 1,5 CV IMAC дене темыныт. Кугыт-лукмо фракций-влакын поглощений спектрыштым поген, поглощений спектр-влакым A880/A280 2,1 утла да A880/A805 4,6 гыч 100 A880 марте A880/A805 коэффициент дене чумырен, нуным вигак йӱштӧ ТЭМ торым ямдылаш але -80°C кӱлеш марте аралаш кучылтыт.
Низкотемпературный ТЭМ-торкым ямдылаш Leica EM GP иммерсионный морозильникым кучылтыныт. Комплексым IMAC буферыште 50 A880 марте луктыныт, вара 5μl у волгыдо QUANTIFOIL 1.2/1.3 углерод дене леведме кӱртньӧ торыш (Agar Scientific, UK) оптеныт. Сетка 20°C да 60% относительный вӱдыжгылык дене 30 с инкубировать, вара тудым 3 s йӱлалтен, а вара тудым -176°C жидкий этаныште йӱлалтен.
RC-LH114-W комплексын данныйже-влакым eBIC (Electronic Bioimaging Center) (British Diamond Light Source) микроскопышто Titan Krios микроскоп дене возен налме, тудо 300 кВ напряжений дене пашам ышта, 130 000× номинальный кугемдымаш да 20 eV Choose gap энергий дене пашам ышта. Данный-влакым погаш шотлымо режимыште сӱрет-влакым возаш K2 пик детектор дене Gatan 968 GIF Quantum кучылталтше. Калиброватлыме пиксель кугыт 1,048Å, а дозым 3,83 e-Å-2s-1. Фильмым 11 секундышто поген, 40 ужашлан шеледен. Углерод дене леведме верым кучылтын, микроскопым уэш фокусироватлыза, вара кажне омсалан кум плёнкым погыза. Чылаже 3130 фильмым погеныт, нунын дефокус значенийышт -1 да -3мкм коклаште лийын.
RC-LH116 комплекслан данныйым тыгаяк микроскоп дене Астербери биоструктура лабораторийыште (Лидс университет, Великобританий) погеныт. Данный-влакым шотлымо режимыште 130 к кугемдыме дене погеныт, а пиксель кугыт 1,065 Å марте 4,6 e-Å-2s-1 дозым дене калиброватлыме. Фильмым 12 секундышто возен налме да 48 ужашлан шелме. Чылаже 3359 плёнкым погеныт, нунын дефокус значенийышт -1 да -3мкм коклаште лийын.
Чыла данныйым обрабатыватлымаш Relion 3.0 конвейерыште (42) шукталтеш. Motioncorr 2 (43) дене пайдаланен, дозым нелыт дене пуч тарванылмашым тӧрлаташ, а вара CTFFIND 4.1 (44) дене CTF (контраст кусарыме функций) параметрым рашемдаш. Тиде тӱҥалтыш обрабатыватлыме этап деч вара тыглай фотомикрографий-влакым 2-шо рисыште ончыктымо. S16. Автоматический ойырен налме шаблон 250 пиксельный кадрыште 250 пиксель наре 1000 частице-влакым кид дене ойырен налме да кок мер (2D) классификаций деч посна ыштыме, тыге образецын лавыртыме але ойыртемалтше характеристикыже уке классификаций-влакым кораҥдыме. Вара чыла микрофотографийыште автоматический ойырен налме, RC-LH114-W 849 359 частице лийын, а RC-LH116 комплекс 476 547 частице лийын. Чыла ойырен налме частице-влак кок турым эртеныт, 2D классификаций деч посна кок турым эртеныт, да кажне куржталме деч вара углерод кумдыкым, образец лавыртымашым, раш палыдыме але пеҥгыдын ваш перныше частице-влакым вашлийше частице-влакым кораҥдат, тидын лектышыштыже 772 033 (90,9%) да 359 678 (75,5 ) частице 3D классификацийлан кучылталтыт. RC-LH114-W да RC-LH116 шот дене. Тӱҥалтыш 3D эҥертыш модельым стохастический градиент йымалне йӧн дене ыштыме. Тӱҥалтыш модельым эҥертыш семын кучылтын, ойырен налме частице-влакым 3D-ште куд категорийлан шеледат. Тиде категорийыште улшо модельым эҥертыш семын кучылтын, эн кугу категорийыште улшо частице-влаклан 3D рафинироватлымашым ыштыза, вара тӱҥалтыш 15Å низкочастотный фильтрым кучылтын, растворитель кумдыкым леведын, 6 пиксель йошкар ӧрдыжым ешарыза да ӱлыл детекторын Gatan K2 пикшым модулироватлыме кусарыме функцийым тӧрлаташ пиксель-влакым постобработкым ыштыза. RC-LH114-W данный-влак наборлан тиде тӱҥалтыш модельым маска ӧрдыжлаште виян тыгыдылыкым кораҥдыме дене вашталтыме (UCSF Chimera-ште тӱҥ комплекс тыгыдылык деч ойырен). Лӱмын ыштыме модель-влак (RC-LH114-W ден RC-LH116-ын разрешенийышт 3,91 да 4,16 Å улыт) 3D классификацийын кокымшо туржылан эҥертыш семын кучылталтыт. Кучылтмо частице-влак тӱҥалтыш 3D классыш чумыргеныт да лишыл еҥ дене пеҥгыде кылым огыт кучо. Перекладывание але раш структур ойыртем укелык. 3D классификацийын кокымшо туржо деч вара эн кугу разрешениян категорийым ойырен налме [RC-LH114-W-лан ик категорий — 377 703 частице (44,5%), RC-LH116-лан кок категорий уло, чылаже 260 752 частице (54,7% W), кунам нуно икгай улыт, кунам нуно икгай улыт. тӱҥалтыш пӧрдмӧ изи ойыртем дене]. Ойырен налме частице-влакым 400 пиксельан лончышто угыч луктыт да 3D рафинироватлымаш дене рафинироватлат. Растворитель маска тӱҥалтыш 15Å низкочастотный фильтр, 3 пиксель картыште кумдаҥмаш да 3 пиксель йошкар маска дене ыштыме. Пер-частица CTF рафинирование кучылтын, пер-частица движения тӧрлымӧ да кокымшо тур пер-частица CTF рафинирование, 3D рафинирование, растворитель маскироватлымаш да послеобработка кажне ошкыл деч вара умбакыже рашемдаш лектыш текстур. FSC (Фурье шелл корреляций коэффициент) 0,143 чек значений дене пайдаланен, RC-LH114-W да RC-LH116 пытартыш модель-влакын разрешенийышт 2,65 да 2,80Å улыт. Пытартыш модельын FSC криволинейныйже 2-шо рисыште ончыкталтеш. S17.
Чыла белок радамым UniProtKB гыч налме: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5); LH1-α (PufA; UniProtID: Q6N9L4); RC-L (PufL; UniProt ID: O83005); RC-M (PufM; UniProt ID: A0A4Z7); RC-H (PuhA; UniProt ID: A0A4Z9); Белок-W (PufW; UniProt ID: Q6N1K3). SWISS-MODEL (45) RC-н гомологий модельжым чоҥаш кучылталтше, тушто RC-L, RC-M да RC-H белок радам-влак да Rba-н кристалл структурыжо улыт. sphaeroides RC шаблон семын кучылталтше (PDB ID: 5LSE) (46). UCSF Chimera-ште «fit map» ӱзгарым кучылтын, генерироватлыме модельым картыште келыштараш (47), белок структурым саемдаш, да кофактор [4×BChl a (мономер библиотекын кодшо лӱмжӧ = BCL), 2×BPh a (BPH), ик але кок тӱрлӧ UQ10 (U10), ик негемовый кӱртньӧ (Fe) да ик гекса-дихогидробон (QAK)] ешарен Coot (48) кучылташ. QAK мономер библиотекыште укелан кӧра, тудым PHENIX-ыште (49) eLBOW ӱзгар дене параметризироватлыме.
Умбакыже LH1 субъединица чоҥалтын. Тӱҥалтыште PHENIX-ыште (49) автомат чоҥымо ӱзгарым LH1 радамын ужашыжым автоматически чоҥаш кучылтыныт, картыште да LH1-α да LH1-β белок радам-влакым пуртымо семын кучылтыныт. Эн тичмаш LH1 субъединицым ойырен налза, тудым луктын, Coot-ыш пуртыза, тушко ситыдыме радамым кид дене ешарыза да кок BCls a (BCL) ден спириллоксантин (CRT) ешарыме деч ончыч пӱтынь структурым кид дене рашемдыза [кӱлешан Rps почеш LH1 комплексын тыгыдылыкше да палыме каротиноид содержанийже. Тӱрлык (17)]. LH1 субъединицым тичмашнек копироватлыза да UCSF Chimera «Docking Map Tool» дене пайдаланен, LH1 тыгыдылык дене воктенысе модель огыл кумдыкышто докироватлыза, вара тудым Coot-ыште рашемдыза; чыла LH1 субъединице-влакым моделироватлыме марте процессым угыч ыштыза. RC-LH114-W структурлан, Coot-ыште ойырымо огыл тыгыдылыкым луктын, USCF Химера картыште кодшо белок огыл компонентла гыч белокым сегментироватлат да тӱҥалтыш модельым ышташлан Autobuild ӱзгарым кучылтыт, а моло субединице-влакым (белок-W) моделироватлымаш. ФЕНИКСыште (49). Coot (48)-ыште лекше модельыш кеч-могай ситыдыме радамым ешарыза, вара уло субъединицым кид дене рашемдыза. Кодшо ойырыдымо тыгыде липид-влакын комбинацийыштлан келшен толеш (PDB мономер библиотеке ID CDL = CDL, POPC = 6PL да POPG = PGT), β-DDM моющий средства (LMT) да UQ10 молекул (U10). PHENIX оптимизацийым (49) да Coot-ыште кид дене оптимизацийым (48) кучылтса, модельын статистике да келыштарыме визуальный качествыжым умбакыже саемдыме марте тичмаш тӱҥалтыш модельым саемдаш. Пытартышлан, LocScale (50) дене верысе картым рашемдыза, вара ойырен налме огыл тыгыдылыкым моделироватлыме да автоматический да кид дене оптимизацийым ыштыме икмыняр моло циклым ыштыза.
Келшыше пептид, кофактор да моло липид да хинон-влак шке плотностьышт дене кылдалтше рис 1 да 2 ончыктымо. S18 гыч S23 марте. Пытартыш модельын статистике информацийже S1 таблицыште ончыкталтеш.
Вес семын палемдыме огыл гын, УФ/Вис/НИР поглощений спектр-влакым Cary60 спектрофотометрыште (Agilent, США) 250 нм гыч 1000 нм марте 1 нм интервал дене да 0,1с интеграций жапыште погеныт.
Образецым кварц кюветыште 2 мм корно дене A880 1 марте луктын, 400 да 1000 нм коклаште поглощений спектрым поген. Йыргешке дихроический спектр-влакым Jasco 810 спектрополяриметрыште (Jasco, Японий) 1 нм 400 нм да 950 нм коклаште 20 нм мин-1 сканироватлыме писылык дене погеныт.
Молярный пытыме коэффициент рашемдалтеш, рӱдӧ комплексым A880 марте 50 наре луктын. 10μl объемым 990μl связывающий буферыште але метанол дене луктын, да вигак поглощений спектрым поген, BChl локтылалтмым иземдаш манын. Кажне метанол образецын BChl содержанийжым 771 нм 54,8 мМ-1 см-1 экстинкций коэффициент дене шотленыт, да экстинкций коэффициентым рашемдыме (51). Висыме BChl концентрацийым 32 (RC-LH114-W) але 36 (RC-LH116) дене шеледыза, тӱҥ комплексын концентрацийжым рашемдаш манын, вара тудым буферыште погымо Extinction коэффициентыште погымо тыгаяк образецын поглощений спектржым рашемдаш кучылтыт. цилиндр. Кажне образецлан кум гана висымашым эртареныт, шотлымо годым BChl Qy максимум кокла поглощенийым кучылтыныт. 878 нм годым висыме RC-LH114-W-н пытыме коэффициентше 3280±140 мМ-1 см-1, а 880 нм-ыште висыме RC-LH116-ын пытыме коэффициентше 3800±30 мМ-1 см-1.
UQ10 (52) йӧн дене шотлымо. Кӱчыкын каласаш гын, Agilent 1200 ВЭЖХ системым кучылтын, обратный фазный ВЭЖХ (РП-ВЭЖХ) ыштыме. 0,02 нмоль наре RC-LH116 але RC-LH114-W 50 мкл 50:50 метанол:хлороформышто, 0,02% (w/v) железохлорид дене, да ончылгоч эквивалентироватлыме Beckman Coulter Ultrasphere ODS 44 мм 1-1-мин эрыкташ. 40°C ВЭЖХ растворительыште (80:20 метанол:2-пропанол) ×25 см колонкышто. ВЭЖХ растворительыште изократический элюцийым ыштен, 275 нм (UQ10), 450 нм (каротиноид) да 780 нм (BChl) 1 шагат жапыште поглощенийым эскераш. 275 нм хроматограммыште 25,5 минут жапыште пик интегрироватлалтеш, тушто нимогай вес рашемдыме соединений лийын огыл. Интегрироватлыме кумдыкым 0 гыч 5,8 нмоль марте ару стандарт-влакым пуртымо гыч шотлымо калиброватлыме криволинейный дене кылдалтше UQ10-ын молярный кугытшым шотлаш кучылтыт (рис. S14). Кажне образецым кум гана лончыленыт, да увертарыме йоҥылыш кокла шот дене SD дене келшен толеш.
RC-LH1 комплексым 0,1 эн кугу Qy поглощенность дене 30 мкМ иземдыме имне шӱм цитохром c2 (Merck, UK) да 0 гыч 50 μMUQ2 (Merck, UK) дене ямдылыме. Кажне UQ2 концентрацийыште кум 1 мл образецым ямдыленыт да висыме деч ончыч пычкемышлан тичмаш келыштарыме лийже манын, 4°C температурышто пычкемышыште йӱдым инкубироватленыт. Растворым OLIS RSM1000 модульный спектрофотометрыш 300 нм тул/500 линий решотка, 1,24 мм пуртымо, 0,12 мм кокла да 0,6 мм лукмо лончо дене пойдареныт. Возбуждение волгыдым кораҥдаш манын, образец фототрубкын да эҥертыш фотоумножитель трубкын пурымаште 600 нм кужытан фильтрым вераҥдыме. Поглощенийым 550 нм дене 0,15 с интеграций жапыште эскереныт. Возбуждающий волгыдо 880 нм M880F2 светодиод гыч (Thorlabs Ltd., UK) 90% куатан оптике кабель гоч DC2200 контроллер гоч (Thorlabs Ltd., UK) лектеш да волгыдо источник деке 90° углом лукталтеш. Висыме пуч зеркало ваштареш шога, кеч-могай волгыдым пӧртылташ манын, тудо тӱҥалтышыште образец дене шыҥдаралтын огыл. Поглощенийым 50 с волгалтарыме деч ончыч 10 с эскерыза. Вара пычкемышыште 60 с жапыште поглощенийым умбакыже эскереныт, хинололын цитохром c23 + шке гыч мыняр иземмыжым аклаш манын (сырьевой данный-влаклан S8 рис. ончо).
Данный-влакым 0,5 гыч 10 с марте (UQ2 концентраций деч шога) линейный тӱҥалтыш скоростьым келыштарыме да кажне UQ2 концентрацийыште чыла кум образецын скоростьшым кокла шот дене обрабатыватлыме. RC-LH1 концентраций, шотлен лукмо келшыше пытыме коэффициент дене, скоростьым каталитический пайдалыкыш савыраш кучылталтше, Origin Pro 2019 (OriginLab, США) программыште ончыктымо, да раш Km да Kcat значений-влакым рашемдаш Michaelis-Menten модель дене келыштарыме.
Эртыше поглощенийым висыме годым RC-LH1 образецым 50 мМ натрий аскорбат (Мерк, США) да 0,4 мМ Тербутин (Мерк, США) дене IMAC буферыште ~2 мкМ марте луктыныт. Аскорбиновый кислота надыр электрон донор семын кучылталтеш, а трет-бутаклофен QB ингибитор семын кучылталтеш, тыге тӱҥ RC донор висыме процесс мучко иземдыме (тиде фотоокисленный огыл) кодеш. Иктаж 3 мл образецым шке ыштыме пӧрдмӧ ячейкыш (диаметрже 0,1 м наре, 350 об/мин) 2 мм оптике корно кужыт дене ешарат, тыге лазер корнышто улшо образецлан возбуждение импульс коклаште пычкемышлан келыштарыме жап сита. ~100-fs лазер импульсым кучылтын, Ti: Sapphire лазер системым (Spectra Physics, США) кугемдаш манын, образецым 880 нм 1 кГц повторений дене тарваташ (NIR-лан 20 нДж але Vis-лан 100 нДж). Данный-влакым погымо деч ончыч образецым 30 минут наре возбуждающий волгыдо деке шындыза. Экспозиций QA-н инактивацийжым луктеш (ик-кок гана QA-м иземдаш лиеш). Но, пожалуйста, палемдыман, тиде процесс пӧртылташ лиеш, вет пычкемышлан келыштарыме кужу жап деч вара RC эркын-эркын QA активностьыш пӧртылеш. -10 гыч 7000 пс марте жапыште эртыше спектр-влакым висаш Helios спектрометрым (Ultrafast Systems, США) кучылтыныт. Данный-влак наборым ойырен налаш Surface Xplorer программе (Ultrafast Systems, США) дене пайдаланен, вара ушен да стандартизироватлен. CarpetView программе пакетым (Light Conversion Ltd., Lithuania) кучылтын, ушнышо данный-влак наборым кучылтын, лушкыдеммаш дене кылдалтше дифференциальный спектр-влакым налын кертыда, але Origin-ыште (OriginLab, США) ик толкын спектральный эволюцийлан келыштарыме ӱзгар вашмут дене икмыняр экспонентым ушен шогышо функцийым кучылтса.
Ӱлнӧ палемдыме семын (53), RC да периферический LH2 антенне уке LH1 комплекс дене фотосинтез плёнкым ямдылыме. Мембраным 20 мМ трис (рН 8,0) дене луктыныт, вара 2 мм оптике корно дене кварц кюветыш оптеныт. 30нДж лазер импульсым кучылтын, образецым 540 нм дене -10 гыч 7000 пс марте жапыште тарватеныт. Данный-влак наборым Rps-лан ончыктымо семын обрабатыватлыза. пал образец.
Мембраным 150 000 RCF 2 шагат жапыште 4°C центрифугироватлыме дене пеллетироватлыме, вара тудын 880 нм поглощенийжым 20 мМ трис-HCl (рН 8,0) да 200 мМ NaCl дене угыч шыҥдареныт. Мембраным 2% (w/v) β-DDM дене 1 шагат жапыште 4°C пычкемышыште йӱкшен лугыза. Образецым 100 мМ триэтиламмоний карбонат (рН 8,0) (TEAB; Merck, UK) дене 2,5 мг мл-1 белок концентраций марте (Bio-Rad анализ) луктыныт. Умбакыже обрабатыватлымашым ончыч савыкталтше йӧн дене (54) эртареныт, 50 мкг белокым 1% (w/v) натрий лаурат (Merck, UK) дене чумыр 50 μl TEAB-ыш лукмо гыч тӱҥалын. с жапыште ультразвук дене пашам ыштыме деч вара тудым 5 мМ трис(2-карбоксиэтил)фосфин (Мерк, Великобританий) дене 37°C 30 минут жапыште иземденыт. S-алкилироватлымашлан образецым 10 мМ метил S-метилтиометансульфонат дене (Merck, UK) инкубироватлаш да 200 мМ изопропанол стоковый раствор гыч 10 минут жапыште пӧлем температур годым ешарыман. Протеолитический вартышым 2 мкг трипсин/эндопротеиназа Lys-C мешак (Promega UK) ешарен эртареныт да 37°C температурышто 3 шагат жапыште инкубироватленыт. Лаурат ПАВ 50 мкл этилацетат да 10 мкл 10% (v/v) LC сортан трифторуксусный кислота (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) ешарен да 60 s жапыште вихревой йӧн дене луктыныт. Фазный ойыркалымашым 15 700 RCF 5 минут жапыште центрифугироватлыме дене кумылаҥдыме. Производительын протоколжо почеш, C18 спин-колонко (Thermo Fisher Scientific, UK) дене пептид дене йымалсе фазым тӱткын аспирироватлаш да шӧрым лукташ кучылталтше. Вакуумный центрифугирование дене сушилке деч вара образецым 0,5% ТФА да 3% ацетонитрил дене эрыктеныт, а 500 нг-ым ончыч лончылымо системе параметр-влакым кучылтын, масс-спектрометрий дене пырля нанофточный РП хроматографий дене лончыленыт.
Rps-ым кычалашлан белокым палемдыме да шотлымо шотышто MaxQuant v.1.5.3.30 (56) кучылтман. palustris протеом данный-влак базе (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426). Масс-спектрометрий протеомика данный-влакым ProteomeXchange альянсыште PRIDE партнерский репозиторий гоч (http://proteomecentral.proteomexchange.org) данный-влак наборын идентификаторжо PXD020402 йымалне вераҥдыме.
RPLC дене анализлан электроспрей ионизаций масс-спектрометрий дене пырля RC-LH1 комплексым дикий тип Rps гыч ямдылыме. Ончыч савыкталтше йӧн дене пайдаланен (16), palustris клеткыште ыштен лукмо белок концентраций 20 мМ Hepes (рН 7,8), 100 мМ NaCl да 0,03% (w/v) β- (Bio-Rad анализ) ) DDM 2 мг мл-1 лийын. Производительын протоколжо почеш, 2D эрыктен комплектым (GE Healthcare, США) кучылтын, 10 мкг белокым осадок йӧн дене луктын, осадкым 20 мкл 60% (v/v) муравейник кислота (FA), 20% (v/v) ацетонитрил да 20% (v/v) вӱд дене эрыктен лукман. Вич микролитрым RPLC (Dionex RSLC) дене масс-спектрометрий дене пырля (Maxis UHR-TOF, Bruker) лончыленыт. MabPac 1.2×100 мм колонкым (Thermo Fisher Scientific, UK) 60°C да 100μlmin -1 ойырен налаш кучылтман, 85% (v / v) растворитель А [0,1% (v / v) FA да 0,02% (V/v) ТФА вӱдыштӧ растворым 85% Bv) градиент дене [0,1%(v/v) FA да 0,02%(v/v) 90%(v/v) ацетонитрил ТФА-ште] 60 минут утла жапыште стандарт электроспрей ионизаций источникым да умолчаний параметр-влакым кучылтын, масс-спектрометр 100 гыч 2750 м/з марте (масса-заряд коэффициент) налеш. ExPASy биоинформатике ресурс портал FindPept инструмент полшымо дене (https://web.expasy.org/findpept/), комплексын субъединицыже-влаклан массовый спектрым картыште ончыктыза.
Клетке-влакым 72 шагат жапыште 100 мл NF-low (10μMm-2 s-1), кокла (30μMm-2 s-1) але кугу (300μMm-2 s-1) волгыдо йымалне куштеныт. М22 среда (М22 среда, кушто аммиак сульфат огеш лий, а натрий сукцинат натрий ацетат дене алмашталтеш) 100 мл винтан ӱмбал лончышто (23). Вич 30-с циклыште 0,1 микрон стеклошергаш-влакым 1:1 объемный отношений дене шарик дене ӱштыныт, клетке-влакым лизироватленыт да 5 минут жапыште лум ӱмбалне йӱлалтеныт. Нерастворимый веществам, пудыртыдымо клетке-влакым да стеклошерст-влакым 16 000 RCF 10 минут жапыште ӱстел микроцентрифугышто центрифугироватлыме дене кораҥдыме. Мембраным Ti 70.1 ротор дене 100 000 RCF 20 мМ трис-HCl (рН 8.0) 40/15% (w/w) сахароза градиент дене 10 шагат жапыште ойыреныт.
Мемнан ончычсо пашаште ончыктымо семын, PufW-ште His тегым иммунодетектор (16). Кӱчыкын каласаш гын, эрыктен налме рӱдӧ комплекс (11,8 нМ) але мембраныште икгай концентраций дене RC (окислений дене рашемдыме, иземдыме ойыртем спектрым кораҥдыме да чиялтыме гельлан нагрузкым келыштарыме) 2x SDS загрузочный буферыште (Merck, UK) кок гана луктын. Белок-влакым 12% бис-трис NuPage гельыште (Thermo Fisher Scientific, UK) ойыреныт. RC-L субъединицам загрузитлаш да ончыкташ манын, гельым Coomassie Brilliant Blue (Bio-Rad, UK) дене чиялтеныт. Кокымшо гельыште улшо белокым иммуноанализлан метанол дене активироватлыме поливинилиденфторид (ПВДФ) мембраныш (Thermo Fisher Scientific, UK) кусареныт. ПВДФ мембране 50 мМ tris-HCl (рН 7,6), 150 мМ NaCl, 0,2% (v / v) Tween-20 да 5% (w / v) обезжиренный шӧр порошок дене блокироватлалтеш, вара анти-His тӱҥ антитела дене инкубироватьлалтеш (антитела буферыште [50 мМ HMl 7.6), 150 мМ NaCl да 0,05% (v/v) Tween-20] 1:1000 A190-114A, Bethyl Laboratories, USA) 4 шагат жапыште. Антител буферыште 5 минут жапыште 3 гана мушмо деч вара, мембраным хрен пероксидаза (Sigma-Aldrich, UK) анти-чыве вторичный антитела дене (1:10,000 антитела буферыште луктын) инкубировать рашемдаш йӧным пуаш (5 минут гыч 3 мушмо деч вара антитела буферыште) WTA CTA 2000 кучылтын. химилюминесценция субстрат (Cyanagen, Италий) да Amersham Imager 600 (GE Healthcare, Великобританий).
ImageJ (57)-ыште кажне чиялтыме гель але иммуноанализ полосан интенсивность шеледымашыжым сӱретлен, пик йымалне кумдыкым интегрироватлыме да RC-L (вияш гель) ден Protein-W (иммуноанализ) интенсивность коэффициентым шотлен лукмо дене. Тиде коэффициент-влакым молярный коэффициентлашке савыреныт, тыге шоненыт: ару RC-LH114-W образецыште RC-L ден белок-W коклаште отношений 1:1 лийын да тидын дене келшышын уло данный наборым нормализоватлыме.
Тиде статьялан ешартыш материалым http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1 сайтыште муаш лиеш
Тиде Creative Commons Attribution License условий почеш шарлыме почылтшо статья. Статья кеч-могай йӧн дене ограниченийым ыштыде кучылташ, шаркалаш да угыч лукташ йӧным пуа, тыгай условийыште, кунам тӱҥ паша чын ончыкталтеш.
Палемдыман: Ме тендан деч электрон почто адресым пуаш гына йодына, тыге еҥ, кудым тый лаштыкыш темлет, пала, мом те нунылан электрон почто ужаш шонеда да тиде спам огыл. Ме нимогай электрон почто адресым огына нал.
Тиде йодыш тендан унагудо улмыдам тергаш да автоматический спам колтымо деч аралаш кучылталтеш.
Дэвид Дж. К. Суэйнсбери, Парк Цянь, Филипп Дж. Джексон, Кейтлин М. Фарис, Дариуш М. Недзвиецки, Элизабет К. Мартин, Дэвид А. Фармер, Лорна А. Малоун, Ребекка Ф. Томпсон, Нил А. Рэнсон, Дэниел П. Каннифф , Марк Дж. Дикман, Дьюи Холтен, Кристина Кирма, Эндрю Хитчер Хантер.
Реакций рӱдерыште волгыдо капкан 1 комплексын кӱкшӧ разрешениян структурыжо хинон динамике нерген у шинчымашым пуа.
Дэвид Дж. К. Суэйнсбери, Парк Цянь, Филипп Дж. Джексон, Кейтлин М. Фарис, Дариуш М. Недзвиецки, Элизабет К. Мартин, Дэвид А. Фармер, Лорна А. Малоун, Ребекка Ф. Томпсон, Нил А. Рэнсон, Дэниел П. Каннифф , Марк Дж. Дикман, Дьюи Холтен, Кристина Кирма, Эндрю Хитчер Хантер.
Реакций рӱдерыште волгыдо капкан 1 комплексын кӱкшӧ разрешениян структурыжо хинон динамике нерген у шинчымашым пуа.
©2021 Наукым вияҥдыме шотышто американ ассоциаций. чыла правам аралыме. AAAS — HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef да COUNTER-ын партнерышт. ScienceAdvances ISSN 2375-2548.